13655409846
一、样本采集
预约采样，每日上午、下午分别采集一批样本，由穿戴三级生物安全防护装备的医护人员采集患者的咽拭子，对于多次咽拭子检测为阳性或高度疑似的患者，进一步采集痰液或肛门拭子。
二、样本包装、运送及接收
收集样品后，将其放入病毒采样管中并冷冻，试管外贴条码。用75%的乙醇喷洒一次性病毒采样管后放在密封袋。每个包装仅限存放一个样品管。样本由专门人员送到实验室。接待人员对箱子的外表面进行消毒，用75%的乙醇喷洒运输样品运输箱表面，将其打开再对箱子进行乙醇消毒。最后，取出样品运输箱并在生物安全柜中打开，检查样品数量是否正确，样品管是否完好，有无破损泄漏。
三、提取样本核酸
通过磁珠法提取核酸RNA，为扩增核酸，使用新冠病毒开放阅读码框和基因编码核衣白核蛋白基因特异性保守序列为靶区，构建双靶基因。与PCR反应溶液结合使用可以通过在定量PCR荧光仪上改变荧光信号来进行RNA检测。
四、检测结果分析
实验中使用的PCR检测系统包括内源内标引物，可通过确定正常内标来监控样本采集、核酸提取及扩增情况，有效减少假阴性检测结果。在每个批次的实验中建立三个阴性质量对照和一个关键的阳性质量对照，将它们随机插入样品中同时检测，以监控实验结果的可靠性。分析结果时应首先检查阴性和阳性质量控制结果，阴性质量控制品的FAM和ROX通道都没有Ct值或Ct值大于40，阳性质量控品FAM, ROX通道和内标通道HEX的Ct值小于等于35。如果质控产品的结果满足上述要求，则实验结果有效，否则结果无效，需重新测试。
每个测试样品的结果应参考试剂盒说明，分析结果如下:(1)如果FAM或ROX通道检测出典型S型扩增曲线，Ct值小于等于40，可以报告为样品中SARS-CoV-2核酸阳性。(2)如果FAM和ROX通道都未测得典型S型扩增曲线，无Ct值或Ct值大于40, HEX通道测得S型扩增曲线，Ct值小于等于40，则样本可以判断为SARS-CoV-2样本核酸阴性。(3)如果FAM,ROX,HEX通道均未测得典型S型扩增曲线，且没有Ct值或Ct值大于40,则表示样本细胞含量低或反应被抑制，样品测试结果无效，需找到原因并消除，重新测试及安全防护。
13655409846